Изучение мочегонного действия крапивы

Изучение мочегонного действия экстракта крапивы двудомной, крапивы жгучей и экстракта крапивы коноплевой травы сухой (водный) проводили на белых крысах обоих полов при однократном пероральном введении. Внутрь зондом вводили экстракт крапивы в дозе 50 мг\мл.

Крысы обоих полов помещались в специально оборудованные индивидуальные клетки, предназначенные для сбора мочи. Животным было предоставлено время для адаптации, во время которой были отбракованы животные со средним суточным диурезом менее 2 мл и более 10 мл.

Моча собиралась один раз в сутки через 24 часа после введения препарата. Из стаканчика, предназначенного для сбора, моча переливалась в мерные пробирки, позволяющие определить объем суточного диуреза, который является первым в ряду важнейших показателей функции почек. Параллельно в скрининговом анализе проводили определение экскреторной функции почек. Показателями которой являются экскреция с мочой ионов натрия и калия, а также уровень клубочковой фильтрации, маркером которой служит креатинин.

Экскреция калия и натрия определялась методом пламенной фотометрии. Суть данного метода заключается в измерении оптической плотности пламени, которая измеряется при сгорании этих ионов. Данным методом определяются как свободные, так и связанные электролиты. На точность определения в методе пламенной фотометрии существенное влияние оказывает предварительная калибровка и разведение испытуемого образца. Калибровка осуществляется последовательным введением в прибор стандартных растворов соответствующего электролита с заранее известной концентрацией иона, причем именно иона, а не соли, применяемой для растворения. Эти расчеты осуществляются по формуле:

Мсоли = Mrсоли * С раствора иона * V/ Mrиона ;

где Мсоли - масса соли, необходимая для приготовления раствора;

Mrсоли - молярная масса используемой соли;

С раствора иона - концентрация раствора иона в мг/л;

V - объем приготовляемого раствора;

Mrиона - молярная масса растворяемого иона.

Данная формула справедлива для любых солей определяемого иона.

Ионы Na+ и К+ находятся совместно в одном калибровочном растворе, так как они оказывают взаимное влияние на оптические характеристики друг друга. Так как в любой биологической жидкости, в том числе и в моче, в достаточном количестве присутствуют оба этих электролита, то не соблюдение данного требование могло привести к искажению результатов эксперимента. В опытах использовались концентрации стандартных растворов Na+/ К+ ???мг/л. Для оптимизации работы сначала изготавливали маточные растворы в большом объеме ( концентрация Na+/ К+ 1000/1000 мг/л), а затем перед экспериментами разводили их до требуемой концентрации. Та часть раствора, которая использовалась для калибровки, отбрасывается и не в коем случае не сливается обратно в общую склянку во избежание изменения концентрации стандартных растворов.

В контрольных испытаниях мочу крыс разводили в ??? раз. Разведение мочи при анализе экскреции калия в 50 раз.

Уровень экскреции электролитов с мочой рассчитывается по формуле:

Е = Д * Р * А / Mr;

где Е - экскреция определяемого иона в ммоль;

Д - величина диуреза;

Р - разведение;

А - показание прибора;

Mr - молярная масса определяемого иона.

Помимо исследования почечной экскреции электролитов, в скрининговом анализе проводили изучение влияния экстракта крапивы на клубочковую фильтрацию. Маркером данного процесса является экскреция креатинина. Креатинин - это вещество образующееся в крови в ходе метаболизма азотистых соединений. При этом он в основном фильтруется и мало реабсорбируется в почках, поэтому уровень его экскреции с мочой прямо пропорционально уровню клубочковой фильтрации. Кроме того, давно установлено, что концентрация креатинина в плазме крови крыс не подвергается существенным колебаниям и, как правило, является стабильным показателем, величиной которой можно пренебречь.

Методика определения креатинина основана на реакции образования основания Шиффа, количество которого затем детектируется фотометрическим способом. В колбу на 50 мл отмеривали 0,5 мл мочи, добавляли 3 мл 1,5% раствора пикриновой кислоты и прибавляли 0,3 мл 2,5 Н раствора NaОН. В ходе описанной реакции креатинин в моче взаимодействует с пикриновой кислотой, образуя основание Шиффа, давая специфическую красно-желтую окраску. После смешивания раствор инкубировали 15 минут при комнатной температуре, затем разбавляли водой до метки в колбе и измеряли оптическую плотность раствора на фотоэлектроколориметре при длине волны λ=490 нм. Для расчетов использовали метод сравнения со стандартным раствором, который готовят аналогичным способом, отмеривая в колбу 0,5 мл раствора с заранее известной концентрацией. В опытах использовали готовый раствор креатинина фирмы Fluka с концентрацией 17,7 ммоль/л ( 2 мг/мл ). Расчет экскреции креатинина осуществлялась по формуле: