Определение спонтанной активности миелопероксидазы нейтрофилов в растворе (модифицированный метод) со спектрофотометрическим учетом результатов

Таким образом, модицированная нами лабораторная тест-система позволяет спектрофотометрически определять активность MPO, спонтанно либерируемой из азурофильных гранул в среду инкубации без нарушения целостности клетки; полностью исключает вероятность удаления части клеток до стадии активного взаимодействия MPO c субстратной хромогенной смесью, значительно увеличивая тем самым концентрацию секритируемой из азурофильных гранул MPO, характеризующая состветветственный повышенный уровень активности фермента, выраженной в единицах оптической плотности, на этапе детекции результатов.

Активность MPO, выявленная с помощью твердофазного метода, включает стадию иммобилизации на планшете и напрямую зивисит от адгезивных свойств Нф (тест-система предусматривает удаление несвязавшихся с твердофазным носителем клеток). И, в отдельных случаях, недостаточное содержание клеток на стадии теста-анализа, характеризующее взаимодействия полиморфноядерных гранулоцитов с субстратом, может значительно снизить показатели ферментативной активности.

Пероксидазная активность Нф, выявленная с помощью лизированных клеток, индуцированных дистилированной водой, также понижена по сравнению с мофицированным методом. Разница ферментативной активности между методами (относительно среднего значения активности фермента в каждой экспериментальной точке для всех доноров в исследуемой выборке) в отношении концентрации клеток, равной 100х103/мл, 400х103/мл, составляет 34% и 18% соответственно.

На этом основании можно предположить, что такая процентная разница, может быть связана с неполной реализацией данной тест-системы (лизису поддверглись не все клетки, находящиеся в дистилированной воде).