
Фармацевтическая этика
Становление этики и деонтологии...
Современная медицинская деонтология, рассматривая проблемы долга, деятельности медицинских и фармацевтических работников, исходит из специфики их труда.

Исследование и его методы
Набор реагентов для иммуноферментного выявления
Набор реагентов «Ротавирус - антиген - ИФА - Бест» (далее по тексту - набор) предназначен для выявления антигена ротавируса человека методом твердофазного иммуноферментного анализа в вирусодержащих культуральных жидкостях при лабораторных исследованиях, в экстрактах фекалий при клинических исследованиях, в образцах питьевой и сточной воды, воды открытых водоемов.
Набор рассчитан на проведение 96 определений, включая контроли, или 12 независимых постановок по 8 анализов каждая, включая контроли [2].
Принцип метода
Специфическими компонентами набора являются моноклональные антитела к группоспецифическому антигену ротавирусов человека, иммобилизованные в лунках планшета; конъюгат поликлональных антител к ротавирусам с пероксидазой хрена и контрольный положительный образец.
Принцип метода заключается во взаимодействии антигена ротавируса с моноклональными антителами, иммобилизованными в лунках полистиролового планшета. Комплекс «антиген-антитело» выявляют с помощью иммуноферментного конъюгата.
После удаления избытка несвязавшегося комплекса и инкубации с раствором ТМБ, происходит окрашивание раствора в лунках. Интенсивность окрашивания пропорциональна концентрации антигена ротавируса в анализируемых образцах. Реакцию останавливают добавлением стоп-реагента и измеряют оптическую плотность растворов в лунках при длине волны 450 нм, референс-волне в диапазоне 620-655 нм.
Оборудование и материалы, необходимые при работе с набором
спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий проводить измерения оптической плотности растворов лунках стрипов в двухволновом режиме: при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения в диапазоне 620-655 нм; или при длине волны 450 нм;
Способ применения
Для выявления антигена ротавируса в фекалиях предварительно готовят экстракт 20%-ной суспензии фекалий. Исследуют надосадочную жидкость.
Определение антигена ротавируса в экстрактах фекалий
Внести: по 100 мкл К+, К-;
По 100 мкл анализируемых образцов.
Внести: по 100 мкл рабочего раствора конъюгата.
Инкубировать: 30 мин, 37 С.
Промыть: промывочным раствором, 400 мкл (600-700 мкл в режиме переполнения), 5 раз.
Внести: по 100 мкл рабочего раствора тетраметилбензидина.
Инкубировать: 25 мин, 18-25 С, в темноте.
Внести: по 100 мкл стоп-реагента.
Измерить: ОП при 450 нм / референсная длина волны 620-655 м.
На основании получинных данных вычислить критическое значение оптическое плотности (ОПкрит) по формуле:
ОПкрит = ОПср(К⁻) + 0,2
Положительным, если ОПобр ≥ ОПкрит, где ОПобр - оптическая плотность исследуемого образца.
Результат анализа считают отрицательным, если ОПобр<ОПкрит
Набор реагентов для иммуноферментного выявления антигена аденовируса человека
Принцип метода
Специфическими компонентами набора являются моноклональные антитела к антигенам аденовируса человека, иммобилизованные в лунках планшета; конъюгат моноклональных антител к аденовирусу с пероксидазой хрена и контрольный положительный образец.
Принцип метода заключается во взаимодействии антигена аденовируса с моноклональными антителами, иммобилизованными в лунках полистиролового планшета. Комплекс «антиген -антитело» выявляют с помощью иммуноферментного конъюгата.
Количество связавшегося коньюгата выявляют цветной реакцией с использованием субстрата пероксидазы - перекиси водорода и хромогена - тетраметилбензидина. Интенсивность окрашивания пропорциональна концентрации антигена аденовируса в анализируемом образце.
Краткая схема ИФА
Внести: по 100 мкл К⁻, К⁺:
По 100мкл образцов.
Внести по 100 мкл рабочего раствора коньюгата
Инкубировать: 30 мин, 37С.
Промыть: промывочным раствором, 400 мкл (600-700 мкл в режиме переполнения),
раз.
Внести: по 100 мкл рабочего раствора тетраметилбензидина.
Инкубировать: 25 мин, 18-25С, в темноте.
Внести: по 100 мл стоп-реагента
Измерить: ОП при 450нм/референсная длина волны 620-655 нм.
На основании получинных данных вычислить критическое значение оптической плотности (ОПкрит) по формуле: ОПкрит=ОПср.К⁻+0,2
Результат онализа считают положительным, если ОПобр≥ОПкрит,где ОПобр - оптическая плотность исследуемого образца.