Регуляция свертывания ингибитором пути тканевого фактора

Рис. 8 Теоретическое описание эксперимента по ингибированию активации фактора X с помощью гипотезы о связывании X-VIIa-TF c Xa-TFPI. Панель А, кривые активации 170 нМ фактора X комплексом VIIa-TF (1024, 512, 384, 256, 192, 128, 64, 32 пМ сверху вниз) в присутствии 2.4 нМ TFPI. панель Б, кривые активации 170 нМ фактора X комплексом 128 пМ VIIa-TF в присутствии 2.4 нМ TFPI преинкубированной с фактором Xa (0, 0.25, 0.5, 1 нМ сверху вниз). Теоретические кривые проведены путем численного интегрирования системы (69-78). Все константы соответствуют Таблице 2. Экспериментальные данные взяты из Fig 2 работы [18]

Рис. 9. Проверка гипотез механизма действия TFPI. Панель А, проверка гипотезы об ингибировании фермент-субстратного комплекса при участии TFPI. Проводилось ингибирование фактора Xa в присутствии и в отсутствие VIIa-TF. Концентрации реагентов: Xa=1 нM, TFPI=1 нM, VIIa-TF=0 или 5 нM. Сверху вниз: кривая в отсутствие VIIa-TF; кривая с VIIa-TF, если реакции нет; кривая с VIIa-TF, если реакция есть. Все константы соответствуют Таблице 2. Панель Б, проверка гипотезы об ингибировании фермент-продуктного комплекса при участии Xa-TFPI. Проводилось ингибирование VIIa-TF комплексом TFPI-Xa в присутствии и в отсутствие Xa. Концентрации реагентов: TF=1 нM, TFPI-Xa=1 нM, Xa=0 или 100 нM. Сверху вниз: кривая в отсутствие Xa; кривая с Xa, если реакции нет; кривая с Xa, если реакция есть. Кривые проведены численным моделирование системы уравнений (69-78) с одним изменением: считалось, что Xa-TFPI ингибирует не X-VIIa-TFPI, а Xa-VIIa-TFPI. Все константы соответствуют Таблице 2

В целом, рассмотренные в гипотезы механизма действия TFPI дают хорошее объяснение известным на настоящий момент экспериментам. Однако, имеющихся данных недостаточно, чтобы сделать выбор между их вариантами и более подробно оценить кинетические параметры этих реакций. Как показывают расчеты, это можно сделать в сравнительно несложных экспериментах (Рис 7А, Б). Используя избыточные концентрации Xa или VIIa-TF, можно создать довольно высокую концентрацию комплекса Xa-VIIa-TF по сравнению с концентрацией свободного лимитирующего компонента. Тогда, при добавлении ингибитора лимитирующего компонента (Xa-TFPI или TFPI, соответственно) скорость реакции ингибирования лимитирующего компонента заметно увеличится по сравнению со скоростью, наблюдаемой в отсутствие избыточного компонента.

Кинетические константы гипотетических реакций ингибирования, найденные с помощью варьирования (Рис. 7А, Б), были использованы для описания кинетики реконструированных систем. На Рис. 9 показано, что с помощью этих констант можно успешно описать влияние TFPI на эти системы.

Рис. 10. Влияние TFPI на образование тромбина в очищенной системе, содержащей факторы IX, X, VIII, V, II в концентрациях, указанных в Таблице 1. Активация производится 1.25 пМ комплекса VIIa-TF. Концентрация TFPI 2.5 нМ (▼) или 0 нМ (■). Экспериментальные данные взяты из работ [87, 88]. Теоретические расчеты (гладкие кривые) произведены по модели (9-34).