Регуляция свертывания ингибитором пути тканевого фактора

Реакция активации фактора Х комплексом VIIa-TF рассматривалась, как протекающая по двухшаговой схеме Михаэлиса-Ментен с добавлением стадии фермент-продуктного комплекса. Мы не нашли литературных данных о кинетических константах образования фермент-субстратного комплекса. Если известна кинетическая константа ассоциации , то, исходя из =435 мин-1, =238 нМ, можно найти его константу диссоциации из соотношения:

=

Из того же соотношения следует, что

2 нМ-1мин-1

Варьирование констант (данные не показаны) показало, что для экспериментов с характерными временами порядка секунд и больше, варьирование значения от 2 нМ-1мин-1 до 10 нМ-1мин-1 и выше не влияет на кинетику системы. Поэтому мы положили ее равной =5 нМ-1мин-1, на основании [43] Это приводит к значению

==770 мин-1.

Константы образования фермент-продуктного комплекса Xа-VIIa-TF (,) также не были обнаружены в литературе. Однако, было показано, что фактор Xa, связывается с VIIa-TF со сродством, лишь немного меньшим, нежели фактор X [19]. Это можно считать убедительным свидетельством в пользу того, что Xa образует с VIIa-TF комплекс, очень похожий на комплекс X-VIIa-TF. Поэтому моделирование производилось при значениях констант (,), равных значениям (, ).

Значения констант гипотетических реакций: взаимодействия фермент-продуктного комплекса с TFPI, ассоциации Xa-TFPI и VIIa-TF с образованием промежуточного ингибиторного комплекса, и внутримолекулярной перегруппировки ингибиторного комплекса были подобраны так, чтобы описать результаты экспериментов из работы [18] (См. Рис 6).

Необходимо отметить, что на самом деле константы взаимодействия Xa и TFPI, измеряемые в эксперименте и приведенные в [18], являются не истинными константами а эффективными. Если гипотетический путь, исследуемый в этой модели, существует, то измеренные значения сложным образом зависят от истинных констант взаимодействия Xa, VIIa-TF и TFPI - , , , , и . Например, в первом приближении

=+

Наблюдаемые и невелики. Ввиду этого не будет большой ошибкой считать истинные константы образования конечного комплекса равными наблюдаемым значениям, а константы гипотетических реакций найти отдельно.

Реакция ингибирования X-VIIa-TF комплексом Xa-TFPI была добавлена следующим способом. Мы считали, что Xa-TFPI взаимодействует с фермент-субстратным комплексом X-VIIa-TF, вытесняя субстрат, фактор Х, и образуя промежуточный ингибиторный комплекс TFPI-Xa-VIIa-TF. Предварительные расчеты показали, что константы , , и практически не влияют на кинетику системы. Поэтому мы положили их равными нулю и слагаемые, отвечающие этим реакциям, в систему уравнений не включены.