Техника биологической пробы

Примечание. Появление клинических симптомов у зараженной мыши нельзя считать характерным для бешенства. Хотя симптомы паралича на 5-й день (или позже) после введения суспензии могут служить основанием для подозрения на наличие заболевания бешенством, эти же симптомы наблюдаются и при многих других вирусных, бактериальных и протозойных инфекциях, поражающих центральную нервную систему. Бесспорное доказательство идентичности вируса получают при помощи реакции нейтрализации с антира-бической сывороткой.

Дальнейшие пассажи инфицированного материала

При необходимости можно приготовить суспензию из ткани мозга мыши, погибшей от инфекции после заражения первоначальным вирусом; эту суспензию можно хранить или использовать в реакции нейтрализации, или, наконец, ввести другой группе мышей.

Вскрытие трупов исследуемых мышей.

Труп мыши фиксируют на дощечке спиной кверху. Для этого необходимо всего две булавки - одной прикалывают основание хвоста, другой - кончик морды. Можно пользоваться и тремя булавками, чтобы фиксировать передние лапы и хвост.

После дезинфекции спиртом кожу головы и шеи отпрепаронывают с помощью ножниц и пинцета и откидывают кпереди; изогнутыми ножницами отделяют крышу черепа, обнажая мозг. С помощью тех же изогнутых ножниц извлекают мозг и переносят его па стерильную чашку Петри. Готовят тонкий срез мозга из области, находящейся кпереди от мозжечка, и переносят его на деревянный шпатель или на бумажную салфетку. Чистое предметное стекло слегка прижимают к поверхности разреза; при этом надавливать следует достаточно сильно, чтобы получить на стекле легкий отпечаток от поверхности среза. Один и тот же отпечаток можно использовать и для окрашивания на тельца Негри и для исследования с помощью флюоресцирующих антител.

Возможные осложнения при проведении биологической пробы

Бактериальное загрязнение инокулируемого материала

Если, несмотря на добавление антибиотиков, мыши погибают от инфекции, вызванной посторонними бактериями, и если первоначальная суспензия подлежит хранению, можно попытаться применить следующие методы, чтобы избежать заражения МЫШ6Й посторонними бактериями.

а) Фильтрование через бактериальные фильтры. Для этой цели следует использовать надосадочную жидкость, полученную после центрифугирования суспензии в течение 15 минут при 1500 об/мин. Поскольку вирус бешенства является довольно крупным, а его концентрация в препаратах, взятых в полевых условиях, не очень велика, при фильтровании неизбежна некоторая потеря вируса.

б) Метод разведения. Иногда суспензию можно разбавить, уменьшив концентрацию в ней бактерий настолько, что заражение ими окажется невозможным, причем вирус сохраняет свою активность. Это, однако, удается редко.

в) Длительное хранение. В некоторых случаях легче бороться с бактериальным загрязнением, если предварительно оставить суспензию на хранение при температуре замораживания или выдержать ее в глицерине.

г) Парентеральная инокуляция. Для парентеральной инокуляции следует брать сирийских хомячков - животных, наиболее восприимчивых к парентеральной инфекции. Мыши сравнительно резистентны к парентеральному заражению вирусом бешенства.

Присутствие двух вирусов

Присутствие какого-либо другого вируса особенно нежелательно, если этот посторонний вирус обладает свойствами, близкими к свойствам вируса бешенства. В этом случае можно попытаться взять для заражения (интрацеребрального и парентерального) животных какого-либо другого вида; это возможно, учитывая широкий спектр инфекционного действия вируса бешенства.