Техника биологической пробы

б) Ступка и пестик. Применение ступки и пестика « издавна зарекомендовавший себя метод измельчения ткани, главным преимуществом которого является то, что используя абразив (например, стерильный песок), с их помощью можно тщательно из мельчить самую плотную ткань. Работа с пестиком и ступкой не обеспечивает такой стерильности, как применение размельчителя Waring или гомогенизатора TenBroeck, однако пестик и ступка легко моются, стерилизуются и могут служить долгие годы.

Суспензионная среда

Выбор среды для приготовления суспензии может быть самым широким; предпочтительно пользоваться изотопическим соленым раствором. Следует отметить, что при применении стерильной дистиллированной воды интрацеребральное заражение иногда не удается. Приведем перечень сред для приготовления суспензии в порядке их доступности.

а) Физиологический солевой раствор с добавлением различных количеств животной сыворотки (10-50%). Это наиболее часто применяемая среда. Необходимо, однако, точно выяснить, не было ли Животное, у которого взята сыворотка, когда-либо вакцинировано прогни бешенства. Исходя из этих соображений, не следует брать сыворотку собак, кошек и рогатого скота. Нормальная баранья сыворотка обладает некоторыми «антивирусными» свойствами, отсутствующими у кроличьей сыворотки. Таким образом, лучше всего пользоваться кроличьей сывороткой, подвергнув ее предварительной инактивации в точение 30 минут (56°). Среду, содержащую сыворотку, можно стерилизовать только путем фильтрования через обычные бактериальные фильтры.

б) Другие среды:

) снятое молоко;

) альбумин бычьей сыворотки в буферном растворе;

) физиологический раствор в дистиллированной воде.

Не рекомендуется широко пользоваться последней средой, хотя вирус бешенства не обладает столь высокой чувствительностью к инактивирующему действию солевого раствора, как вирусы восточного или западного энцефаломиелита лошадей.

Примечание. Если суспензия подлежит замораживанию и хранению, то в качестве суспензионной среды лучше всего пользоваться 50% раствором сыворотки в воде.

Стерильность

Если взятие ткани мозга во время аутопсии производилось с соблюдением всех правил асептики и если кусочки были присланы в лабораторию в стерильном сосуде, то нет необходимости добавлять к суспензии антибиотики. Для сохранения материала рекомендуется пользоваться 50% раствором глицерина, так как глицерин действует не только как консервант, но и как бактериостатический агент. Если же имеется какое-нибудь сомнение в том, что были соблюдены все требования антисептики, лучше добавить к суспензии некоторое количество стрептомицина и пенициллина так, чтобы получить конечную концентрацию антибиотиков 2 мг/мл и 500 ЕД/мл соответственно. После добавления антибиотиков к суспензии следует выждать 30 минут, прежде чем производить инокуляцию.

При приготовлении суспензии из ткани слюнных желез антибиотики рекомендуется добавлять во всех случаях. Независимо от того, добавляются ли антибиотики, суспензию ткани слюнных желез надо инкубировать для выявления бактериального загрязнения; в качестве среды для этой цели можно применять обычный бульон, тиогликолатпую среду и кровяной агар. При обнаружении бактериального роста надо попытаться идентифицировать микроорганизмы. Если результаты биологической пробы окажутся сомнительными, рекомендуется проверить вирулентность выделенного микроорганизма при интрацеребралыюм заражении мышей. Концентрация инфицированной ткани в суспензии