Бешенство

Гистологический метод. Основан на обнаружении в клетках нервной ткани специфических цитоплазматических телец-включений Бабеша-Негри. Этот метод служит вспомогательным, так как не у всех животных он позволяет обнаружить тельца. Но оценке различных исследователей, тельца Бабеша-Негри не удается обнаружить в 10 .50 % случаев заболевания по ряду объективных причин: длительность течения болезни, свойства возбудителя, своевременное взятие материала для исследования, правильность его хранения и доставка в лабораторию.

Из патологического материала (амоновы рога, кора больших полушарий, мозжечок, продолговатый мозг) готовят мазки-отпечатки. При изготовлении мазков не следует брать слишком большие кусочки мозговой ткани, так как при надавливании и разма-нлвании получаются толстые слои. Для окрашивания мазков используют различные методы: по Селлерсу, Морозову, Манну и др. Окрашенные препараты просматривают под световым микроскопом. Положительным результатом считают, когда обнаруживают четко очерченные овальные или продолговатые гранулярные образования диаметром 2 .10мкм (тельца Бабеша-Негри) розово-красного или другого, в зависимости от красителя, цвета, расположенные в нейронах. При просмотре нередко находят сформированные тельца вне клеток; их также надо учитывать при постановке диагноза. Для дифференцирования телец Бабеша- Негри от других внутриклеточных включений, встречающихся при чуме плотоядных и инфекционном гепатите, применяют обычную окраску препаратов гематоксилин-эозином.

Реакция диффузной преципитации (РДП). Эту реакцию достаточно широко применяют для выявления антигена вируса бешенства. Сущность метода заключается в свойстве анти-, тел-преципитинов и гомологичных им антигенов диффундировать в агаровом геле и при соединении образовывать линии преципитальных комплексов антиген-антитело. Эти линии видны в проходящем свете при просвечивании осветителем снизу вверх. Вирус бешенства образует с антирабической сывороткой одну или две линии преципитации. Для постановки положительного диагноза на бешенство достаточно образование линии преципитации с материалом в одном из отделов мозга (мозжечок, кора полушарий мозга, амоновы рога, продолговатый мозг). При получении отрицательных результатов с материалом, не подвергшемся разложению, ставят биопробу на белых мышах или кроликах.

В настоящее время в целях диагностики РДП применяют как дополнительный тест из-за ограниченной его чувствительности (65 .70 %). Причиной этого является низкий титр вируса в исследуемом материале; титр должен быть не ниже 4,5 lg ЛД50. В нашей стране выпускается набор компонентов для диагностики бешенства животных в реакции диффузионной преципитации (производитель ВНИИТиБП).

Метод флуоресцирующих антител (МФА). Ш всех серологических методов МФА получил широкое распространение. Основные его достоинства заключаются в высокой чувствительности (90 .99%), специфичности, простоте постановки и возможности получения результатов в течение нескольких часов. По точности он сопоставим с биопробой, но превосходит ее за счет выявления антигена вируса с низким титром и вирулентностью в исследуемом материале. Сущность метода заключается в соединении меченых антител со специфическим антигеном и наблюдении светящихся комплексов антиген-антитело под люминесцентным микроскопом. Наиболее широкое распространение получил прямой метод, когда меченные ФИТЦ антирабические антитела наносят непосредственно на мазки-отпечатки, срезы мозга, монослой клеток. Непригодны для исследования пробы мозга, консервированные спиртом, формалином и другими средствами вызывающими денатурацию и разрушение антигена вируса.

Фиксируют препарат ацетоном. При исследовании под люминесцентным микроскопом антиген вируса бешенства имеет вид ярких желто-зеленых или зеленых гранул различной формы и величины, сравнимых с тельцами Бабеша-Негри, на темном серо-зеленоватом фоне.