Физиологическая роль миелопероксидазы в норме и при патологии

Миелопероксидаза (MPO) является одной из самых изученных эндогенных пероксидаз млекопитающих. Основной функцией МРО в организме является защита от внешней инфекции, однако при ряде условий она может вызывать повреждение собственных тканей организма в очагах воспаления [6].

Молекула МРО (М 150 кД) состоит из двух идентичных, соединенных между собой дисульфидной связью, димеров, каждый из которых содержит гликозилированную тяжелую α-субъединицу (57 кД) с ковалентно связанным гемом (протопорфирин IX с ионом железа в центре) и негликозилированную легкую β-субъединицу (12 кД) [6, 11].

Данный фермент содержится в азурофильных гранулах нейтрофилов (до 5% сухого веса клетки), а также в моноцитах и некоторых типах тканевых макрофагов [35].

Биосинтез МРО осуществляется во время дифференциации миелоцитов в костном мозге и заканчивается ко времени выхода зрелых гранулоцитов и моноцитов в кровеносное русло. После активации Фк происходит дегрануляция, и МРО секретируется либо внутрь фагосомы, либо во внеклеточное пространство (межклеточная жидкость, кровь). При наличии воспаления уровень свободной МРО в крови повышается. Будучи катионным белком, МРО может связываться с отрицательно-заряженной клеточной мембраной, в частности эндотелиальной, и при наличии субстрата может вызывать окислительные повреждения тканей организма в очагах воспаления.

В клинической практике активность МРО нейтрофилов служит маркером интенсивности воспалительных процессов, а также является перспективным диагностическим и прогностическим показателем при ряде заболеваний и патологических состояний [45].

Повышенный системный уровень МРО (содержание МРО в нейтрофилах и в кровотоке) ассоциируется с наличием коронарных артериальных заболеваний и может увеличивать риск развития неблагоприятных кардиологических событий (инфаркт миокарда, внезапная смерть и др.) у больных с грудной болью и острым коронарным синдромом. Кроме того, повышенный уровень МPО может способствовать развитию атеросклероза, системных васкулитов различной этиологии, многих воспалительных процессов хронического течения [41].

С другой стороны, снижение и исчезновение активности МPО сопровождается падением резистентности организма к инфекции, что является одним из ведущих факторов генерации патологического процесса.

Целью данной работы является модификация лабораторного метода для спектрофотометрического определения спонтанной активности MPO полиморфноядерных гранулоцитов периферической крови человека и его сравнительная оценка c различными лабораторными методами определения активности MPO нейтрофилов.

Для реализации данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Модифицировать лабораторный метод определения спонтанной активности MPO нейтрофилов периферической крови человека с целью проведения всех стадий анализа в растворе для спектофотометрической оценки результатов

2. Сравнить результаты, полученные с использованием модифицированного лабораторного метода с результатами, полученными с применением других методов оценки активности MPO

. Оценить модифицированный лабораторный метод с точки зрения основных требований, предъявляемых к лабораторным методам определения активности ферментов в клинических условиях

• Гранулярный состав и продукты секреции полиморфноядерных гранулоцитов
• Физиологическая роль миелопероксидазы в норме и при патологии
• Методы оценки ферментативной активности нейтрофилов
• Использованные материалы
• Получение полиморфноядерных гранулоцитов из периферической крови
• Определение активности миелопероксидазы полиморфноядерных гранулоцитов в спонтанном тесте
• Статистическая обработка результатов
• Определение активности миелопероксидазы полиморфноядерных гранулоцитов в тесте с использованием клеток, иммобилизованных на гидрофобной поверхности
• Определение активности миелопероксидазы в клеточном лизате полиморфноядерных гранулоцитов
• Определение спонтанной активности миелопероксидазы нейтрофилов в растворе (модифицированный метод) со спектрофотометрическим учетом результатов
• Сравнительная оценка модифицированной лабораторной тест-системы определения активности MPO Нф в растворе с «Референтным методом»